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【瓊脂糖凝膠電泳】 真假GelRed對(duì)比試驗(yàn)
更新時(shí)間：2013-09-04 瀏覽次數(shù)：3144
目前市場(chǎng)上幾種代表性的核酸染料：
GelRed是一款集高靈敏度、低毒性和光穩(wěn)定性于一體的核酸凝膠染料。由于染料分子不能透過(guò)人體細(xì)胞膜，保證了實(shí)驗(yàn)環(huán)境的安全與潔凈。該產(chǎn)品已通過(guò)美國(guó)環(huán)保局安全認(rèn)定，廢棄物可直接倒入下水道，不會(huì)造成任何環(huán)境污染。
EB （溴化乙啶）是早期分子實(shí)驗(yàn)中常用的小分子核酸凝膠染色劑，但染色效果并不靈敏，背景熒光信號(hào)太強(qiáng)，分辨率不高。zui重要的EB是一種高誘變性致癌的化學(xué)物質(zhì)。
SYBR Green I和 SYBR Gold 也被廠家宣傳為靈敏的凝膠染色試劑。但 SYBR Green I 尤其是 SYBR Gold 在常用的微堿性電泳緩沖溶液或預(yù)制凝膠中會(huì)快速降解，穩(wěn)定性差導(dǎo)致染色效果極不可靠。 SYBR safe 雖然被認(rèn)為安全，但它的染色靈敏度遠(yuǎn)遠(yuǎn)達(dá)不到標(biāo)準(zhǔn)。
Goldview從對(duì)比試驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，該產(chǎn)品就是AO（丫啶橙，一種致癌產(chǎn)品，且熒光亮度不佳）。請(qǐng)看Goldview 與 AO 對(duì)比試驗(yàn)結(jié)果。
下面看一下實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
結(jié)果一：
圖一結(jié)果顯示：采用同樣的樣品及電泳條件（點(diǎn)泳池中跑4塊25 ml的凝膠）：
美國(guó)原裝GelRed實(shí)驗(yàn)效果，原裝GelRed染色背景低，染料靈敏度高，分辨率強(qiáng)。
而某假貨GelRed和EB背景亮度相當(dāng)。另外在使用過(guò)程中：發(fā)現(xiàn)biotium的GelRed染料呈鮮艷的紫紅色，加入后極易擴(kuò)散，不會(huì)掛在燒瓶壁上，而假貨生物的染料呈暗淡的紅色偏褐，加入時(shí)不易擴(kuò)散，需搖晃才能擴(kuò)散，且擴(kuò)散后顏色偏土黃。
就實(shí)驗(yàn)特征而言，假貨經(jīng)銷商的gelred和EB的添加效果非常相似，懷疑其中有添加EB或goldview。
圖1 原裝GelRed、假貨GelRed、DuRed及EB四種核酸凝膠染料的效果對(duì)比圖。所使用的樣品均采用小片段質(zhì)粒（濃度100 ng/ul，上樣量均為3 ul）；marker采用天根生化的DNAmarker 3；染料使用量均為1 ul染料加入25 ml瓊脂糖凝膠中；條件 1%濃度的瓊脂糖凝膠，電壓150V；400A 時(shí)間為20 min。EB采用泡染法染色8 min。
結(jié)果二：
圖二就推薦濃度問(wèn)題做了對(duì)比試驗(yàn)，結(jié)果表示：按照推薦濃度（1:10000，如2.5 ul加入到25 ml膠中），GelRed染料由于染料分子偏大，會(huì)對(duì)marker的大片段遷移有一定影響，偶爾會(huì)造成拖帶，微笑條帶等情況。但是小片段分離效果較好；
另外某假貨經(jīng)銷商的假貨GelRed小條帶幾乎彌散，消失不見(jiàn)了。
圖2 原裝GelRed與假貨GelRed染料按照推薦濃度跑膠效果對(duì)比圖。所使用的樣品均采用小片段質(zhì)粒（濃度100 ng/ul，上樣量均為3 ul）；marker采用天根生化的DNAmarker 3；染料使用量均為2.5 ul染料加入25 ml瓊脂糖凝膠中；條件 1%濃度的瓊脂糖凝膠，電壓150V；400A 時(shí)間為20 min。
綜合以上結(jié)果，可以看出：
1. 假貨GelRed背景很亮與EB相似，使用顏色又有點(diǎn)偏向GoldView紅褐色；懷疑假貨中摻入的是致癌誘變?nèi)玖螮B與GoldView的混合物；而且小片段容易彌散，消失。
2. 原裝GelRed的*使用濃度為 2 ul加入到50 ml膠，1ul加入25 ml膠中（圖一）。說(shuō)明書(shū)中推薦濃度使用染料時(shí)，偶爾會(huì)影響大片段DNA的遷移。
建議廣大用戶從廠商購(gòu)買(mǎi)安全的原裝產(chǎn)品，避免上當(dāng)受騙。