DNA實(shí)驗(yàn)技術(shù)：染色體GTG標(biāo)本制備
更新時(shí)間：2013-08-06 瀏覽次數(shù)：1733
一、原理
非顯帶染色體除可根據(jù)形態(tài)分辨部分染色體，其他多數(shù)染色體難以確認(rèn)，而顯帶技術(shù)則可使染色體縱向長(zhǎng)度上出現(xiàn)不同帶紋，以辨認(rèn)全部染色體。GTG即G帶，Trypsin（胰酶），Giemsa的簡(jiǎn)寫。Giemsa染料是噻嗪——曙紅染料，染色體的著色有賴于在原位形成噻嗪--曙紅（2∶1）的沉淀物。著色首先取決于二個(gè)噻嗪分子同DNA結(jié)合，在此基礎(chǔ)上再結(jié)合一個(gè)曙紅分子，其次取決于一個(gè)疏水環(huán)境，以利于染料沉淀而著色。通過(guò)胰酶的顯帶預(yù)處理可除去陰性G帶區(qū)的疏水蛋白，或使它們的結(jié)構(gòu)變成更疏水狀態(tài)。由此可知，在G顯帶中抽取的蛋白往往是疏水的，且主要來(lái)自陰性G帶區(qū)。
二、用品和試劑
0.25%胰酶（0.85%NaCl配制，pH為7.2-7.4），余同實(shí)驗(yàn)一。
三、操作步驟
1. 標(biāo)本老化：
按常規(guī)制備人外周血淋巴細(xì)胞染色體標(biāo)本（未染色）氣干后，經(jīng)78℃烘箱2-3小時(shí)。 取出置37℃恒溫箱3天后預(yù)處理。
2. 胰酶預(yù)處理：
將染色體標(biāo)本浸入胰酶溶液（已置4℃冰箱穩(wěn)1小時(shí)以上）中40-50秒，取出立即水洗去多余胰酶。
3. Giemsa染色：
1∶10 Giemsa染色液染色5-10分鐘，洗去多余染料，氣干。
4. 鏡檢：油鏡下可見(jiàn)分散良好的染色體縱軸上呈現(xiàn)深淺不同帶紋，即為可讀標(biāo)本。
四、注意事項(xiàng)
1. 常規(guī)制備的染色體標(biāo)本，要有較多分裂相，分散良好，染色體長(zhǎng)度適中。
2. GTG帶的關(guān)鍵在于胰酶處理的時(shí)間。若染色體仍著色較深，帶紋不明，則預(yù)處理時(shí)間不足，應(yīng)延長(zhǎng)預(yù)處理時(shí)間；若染色體變粗并顯出毛糙邊緣，甚至呈糊狀，則為預(yù)處理過(guò)度，應(yīng)適當(dāng)縮短處理時(shí)間。
3. Giemsa染色時(shí)間要適中，時(shí)間短，著色不夠，深淺帶反差??；時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，著色深，亦影響帶紋反差，不易識(shí)別。