R&D Systems ELISA產(chǎn)品常見問(wèn)題解答（2）
更新時(shí)間：2012-10-03 瀏覽次數(shù)：2441
R&D Systems ELISA產(chǎn)品常見問(wèn)題解答
問(wèn)：什么是R&D Systems的抗體配對(duì)？
答：R&D Systems的抗體配對(duì)是一個(gè)自己動(dòng)手的產(chǎn)品。R&D Systems建議此產(chǎn)品的使用者在免疫測(cè)試的開發(fā)方面應(yīng)很有造詣。使用者必須以經(jīng)驗(yàn)為依據(jù)來(lái)決定捕獲抗體和測(cè)試抗體的*濃度。R&D Systems的重組細(xì)胞因子并未經(jīng)ELISA校正，所以在使用前必須經(jīng)ELISA做質(zhì)量校正。更多有關(guān)ELISA開發(fā)的信息可以參照我們的ELISA開發(fā)指網(wǎng)：http://www.rndsystems.com/tsg_detail_objectname_elisa_development.aspx
問(wèn)：Quantikine和QuantiGlo ELISA試劑盒有何不同？
答：R&D Systems的Quantikine牌子的ELISA試劑盒是一種比色法檢測(cè)，需要一臺(tái)標(biāo)準(zhǔn)讀光儀配備有合適的濾光片可用于讀數(shù)和光波長(zhǎng)校正。QuantiGlo ELISA試劑盒采用了一種熒光底物，計(jì)數(shù)為光流明或相對(duì)光單位（RLU）。因此，QuantiGlo ELISA試劑盒需要有熒光讀光儀。這種熒光讀光儀需設(shè)置在：1.0分鐘的滯待時(shí)間；1.0秒/孔的讀數(shù)時(shí)間；累計(jì)狀態(tài)；自動(dòng)獲取開啟。R&D Systems使用Dynex Technologies的熒光讀光儀。
問(wèn)：普通Quantikine ELISA試劑盒同高靈敏Quantikine ELISA試劑盒有何不同？
答：高靈敏Quantikine ELISA試劑盒一般用于非常低量的細(xì)胞因子的檢測(cè)，比如正常人（健康狀態(tài)時(shí)）的血清和血漿。當(dāng)普通Quantikine試劑盒一般檢測(cè)不到（或幾乎檢測(cè)不到）正常人血清和血漿中的細(xì)胞因子，可選擇高靈敏Quantikine。我們建議實(shí)驗(yàn)者先查閱文獻(xiàn)資料來(lái)確定試驗(yàn)的測(cè)試范圍以選擇所需的試劑盒的種類。
問(wèn)：R&D Systems的Quantikine試劑盒是否可用于組織勻漿（或其它未經(jīng)檢驗(yàn)的）樣本？
答：很遺憾，R&D Systems尚未采用組織勻漿作為樣本對(duì)Quantikine系列的試劑盒做效果驗(yàn)證。如果要決定試劑盒是否可用于未經(jīng)檢定的樣本，實(shí)驗(yàn)者先做一個(gè)“摻入和回收預(yù)試驗(yàn)”。簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)，實(shí)驗(yàn)者將樣本分為兩份：一份中摻入一定量的試劑標(biāo)準(zhǔn)，然后做一稀釋系列（一般稀釋到1:16），再將摻入過(guò)的一份同未摻入的一份相比。采用以下的公式來(lái)計(jì)算回收率（%）：測(cè)試值（pg /毫升）/ 期待值（pg /毫升）x 100% = % 回收率。一般來(lái)說(shuō)，回收率在80-120%可認(rèn)為是可接受的。但是，可接受范圍應(yīng)由每一實(shí)驗(yàn)室自行決定。這種方法可用于檢定未被R&D Systems檢定的任何樣本。我們還有更加詳細(xì)的“摻入和回收”的實(shí)驗(yàn)步驟，可向我們的技術(shù)服務(wù)部索取。我們也可進(jìn)一步查閱文獻(xiàn)看一看是否有其他試驗(yàn)人員用我們的產(chǎn)品做過(guò)不同的樣本，或不同的屬種。
問(wèn)：加入稀釋劑是否會(huì)將樣本進(jìn)一步稀釋？
答：因?yàn)橄♂寗┦羌尤氲剿械目字?，?biāo)準(zhǔn)和被測(cè)樣本都被同樣稀釋，所以樣本的濃度可從標(biāo)準(zhǔn)曲線讀出，而不需作稀釋調(diào)整。
問(wèn)：我是否可將標(biāo)準(zhǔn)曲線的兩端延伸？
答：在任何情況下，我們都不支持超出確定范圍的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。在我們確定的測(cè)試范圍，我們保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可重復(fù)性。
問(wèn)：為什么不將測(cè)試范圍延伸到所述的靈敏度？
答：靈敏度是統(tǒng)計(jì)中大于零的可測(cè)到的zui低值。它是通過(guò)本底信號(hào)和試驗(yàn)的可變性計(jì)算出來(lái)的。靈敏度是將20個(gè)零復(fù)制物的中值加兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差從標(biāo)準(zhǔn)曲線換算成分析物的濃度。而zui低標(biāo)準(zhǔn)是我們可以放心的、仍可與標(biāo)準(zhǔn)曲線成直線相關(guān)的zui低點(diǎn)，因而是可定量的。
問(wèn)：Quantikine試劑盒中的試劑是否可互換？
答：如果試劑盒（RD1-, RD5-, RD6-）中的稀釋劑有相同的組件號(hào)和批量號(hào)，它們可以互換。R&D Systems做“整個(gè)試劑盒的質(zhì)量控制”，就是說(shuō)，我們不支持不同批號(hào)之間的替代。在任何情況下，微孔板和共軛物都不可互換。
問(wèn)：Quantikine試劑盒中的洗液是否可互換？
答：如果組件號(hào)相同，洗液在相同類型的試劑盒之間（普通試劑盒之間，或高靈敏度試劑盒之間）是可以互換的。但是，普通Quantikine試劑盒中的洗液不能用于高靈敏度的試劑盒，在普通Quantikine試劑盒中的洗液含有磷酸，會(huì)干擾高靈敏度Quantikine試劑盒中由NADPH驅(qū)動(dòng)的信號(hào)擴(kuò)增。
問(wèn)：在某些實(shí)驗(yàn)中為什么必須使用聚丙烯（polypropylene）的試管做標(biāo)準(zhǔn)稀釋？
答：有些細(xì)胞分子會(huì)粘到玻璃或聚苯乙烯（polystyrene），但不粘聚丙烯。
問(wèn)：在Quantkine試劑盒中沒有足夠的RD5校正物來(lái)稀釋我的細(xì)胞上清液，我該怎么辦？
答：你可用細(xì)胞培養(yǎng)液來(lái)做起始的稀釋，直接移液到微孔板的zui終的1:10稀釋可使用校正物來(lái)稀釋。
問(wèn)：我的Quantikine試劑盒中的RD1測(cè)試稀釋劑看上去有沉淀物，可以用嗎？
答：有些RD1測(cè)試稀釋劑的確有不同程度的沉淀物。在這種情況下，我們?cè)趯?shí)驗(yàn)步驟手冊(cè)中已做紀(jì)錄。
問(wèn)：標(biāo)準(zhǔn)曲線為什么要采用4-pl擬合？
答：R&D Systems在研發(fā)和質(zhì)控我們絕大多數(shù)的Quantikine ELISA試劑盒時(shí)，采用4-相參數(shù)的曲線擬合（又名為4-pl或sigmoidal曲線擬合）。一般來(lái)說(shuō)，它比log-log和直線有更好的曲線擬合。如果數(shù)據(jù)分析不可用4-pl的話，log-log是下一個(gè)的選擇。
問(wèn)：試驗(yàn)步驟中說(shuō)要用500 rpm，我的搖床達(dá)不到。這個(gè)速度是正確的嗎？
答：500 rpm使用的是
問(wèn)：我有太大變異系數(shù)（CV）的問(wèn)題，是怎么回事？
答：zui大但不是*的兩個(gè)原因，可能是移液誤差和清洗方式。你可參照我們的《如何成功地操作ELISA指導(dǎo)》，：http://www.rndsystems.com/tsg_detail_objectname_elisa.aspx
問(wèn)：Quantikine ELISA試劑為什么需要做稀釋？
答：主要有兩個(gè)原因：一，在絕大多數(shù)的樣本中細(xì)胞因子的含量非常高，如不經(jīng)稀釋，讀數(shù)將高于標(biāo)準(zhǔn)曲線；二，也是zui普遍的原因我們建議做稀釋，是將樣本中的干擾或基質(zhì)效應(yīng)稀釋掉。
問(wèn)：我是否可以在任何過(guò)夜步驟停止Quantikine試驗(yàn)、延長(zhǎng)溫育時(shí)間、或提高溫育的溫度？
答：R&D System不建議對(duì)任何Quantikine ELISA延長(zhǎng)溫育時(shí)間。而且，當(dāng)實(shí)驗(yàn)步驟改變了，我, , 們無(wú)法保證Quantikine ELISA的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。R&D System做“整個(gè)試劑盒的質(zhì)量控制”，就是說(shuō)我們無(wú)法支持改變過(guò)的實(shí)驗(yàn)步驟，因?yàn)樗鼈兾唇?jīng)質(zhì)量控制。延長(zhǎng)溫育時(shí)間、或提高溫育溫度以縮短溫育時(shí)間會(huì)提高實(shí)驗(yàn)的本底（又名空白或零標(biāo)準(zhǔn)）。這樣一來(lái)，樣本和標(biāo)準(zhǔn)中的低量細(xì)胞因子會(huì)測(cè)不到，因?yàn)樵龈吡说谋镜仔盘?hào)將從所有孔中的數(shù)值中差減。
問(wèn)：我用了DuoSet ELISA開發(fā)系統(tǒng)，但幾乎就沒有顏色產(chǎn)生。那些步驟可能出了問(wèn)題？
答：很多方面都會(huì)影響到顏色的產(chǎn)生。比如：
1） BSA的干擾。選擇不含脂肪酸的ELISA級(jí)別的BSA很重要，可以降低球蛋白對(duì)實(shí)驗(yàn)的干擾。R&D Systems建議使用Serological Proteins的BSA（目錄#82-045）。
2） 非室溫下的試劑在使用時(shí)會(huì)抑制信號(hào)；如果室溫過(guò)低，信號(hào)也會(huì)被抑制。
3） 如果使用了未表明為“高結(jié)合性ELISA”的微孔板，捕獲抗體同微孔板的結(jié)合就不牢固，從而導(dǎo)致測(cè)試的顏色產(chǎn)生過(guò)低。
4） 任何試劑，如果配制出錯(cuò)、儲(chǔ)藏不當(dāng)、或已過(guò)期，都將出現(xiàn)這一問(wèn)題。
5） 讀板時(shí)使用的波長(zhǎng)同低物的波長(zhǎng)不一致。
問(wèn)：我是否可以使用你們的抗體配對(duì)ELISA中的抗體，但用另一家公司的蛋白為標(biāo)準(zhǔn)？
答：若使用一家公司的抗體而用另一家公司的標(biāo)準(zhǔn)的帶來(lái)問(wèn)題是它們會(huì)有不同的免疫活性（或不同的抗體與重組蛋白的結(jié)合力）。這種現(xiàn)象的出現(xiàn)是因?yàn)樽鳛闃?biāo)準(zhǔn)的重組蛋白同作為抗體免疫原的重組蛋白在蛋白序列或折疊中會(huì)有所不同，如果蛋白序列或折疊的不同發(fā)生在抗體結(jié)合部位，就會(huì)引起抗體對(duì)重組蛋白標(biāo)準(zhǔn)的不識(shí)別或識(shí)別很差。