小白鼠骨髓細(xì)胞染色體顯帶（C帶）技術(shù)
更新時(shí)間：2015-06-08 瀏覽次數(shù)：1714
實(shí)驗(yàn)原理
染色體顯帶（Banding）技術(shù)是一種用染料對(duì)染色體進(jìn)行分化染色的方法。就是將染色體經(jīng)酸、堿、溫度等處理后，再以染料染色，或單用某些熒光染料就可以染出深淺不同或明暗各異的帶紋的縱向結(jié)構(gòu)。此項(xiàng)技術(shù)發(fā)明于本上世紀(jì)六十年代末、七十年代初，發(fā)展至今已是非常成熟。1971年在巴黎召開第四次人類遺傳學(xué)會(huì)議上制定了人類染色體識(shí)別的統(tǒng)一體制，訂出了各條染色體分帶的寬窄、位置和名稱；1981年又公布了《人類細(xì)胞遺傳學(xué)高分辨率顯帶命名體制》，這些規(guī)定目前為世界各國學(xué)者所普遍采用。在我國，染色體顯帶工作起步于70年代，主要以核型為主，臨床上則以染色體異常疾患為主。目前，人類染色體顯帶在一些醫(yī)院中正成為常規(guī)化驗(yàn)項(xiàng)目之一。
染色體顯帶技術(shù)在人類和動(dòng)物方面的研究取得了顯著的成果，植物染色體顯帶雖然一直落后于人類及動(dòng)物染色體顯帶技術(shù)，但近些年來也取得了很大的進(jìn)展，主要原因是植物染色體帶紋簡單，使得該技術(shù)在實(shí)際應(yīng)用上受到限制。
顯帶技術(shù)可以分成兩大類：一類產(chǎn)生分布于整個(gè)染色體長度上的帶紋，如Q帶、G帶、R帶等；另一類則只能使少數(shù)特點(diǎn)的帶或結(jié)構(gòu)染色，如C帶（使著絲粒即異染色質(zhì)著色）、T帶（使染色體端粒著色）、N帶（使核仁組織區(qū)即次級(jí)縊痕著色）。
不同的顯帶技術(shù)采用的處理方法各異，經(jīng)過處理使染色體的結(jié)構(gòu)和組成差異表現(xiàn)為對(duì)染料親和性的不同。對(duì)各種不同帶型產(chǎn)生的機(jī)理有各種看法和推斷，目前還在進(jìn)一步探索中。
由于經(jīng)顯帶處理后，染色體上帶紋的數(shù)目、位置、寬窄及染色的深淺都具有相對(duì)的穩(wěn)定性，具有一定的種屬特異性，所以可以將它作為一種更精細(xì)的標(biāo)志，使我們能更有效地鑒別染色體，分析染色體組型，進(jìn)行物種間親緣關(guān)系的鑒定，更深入地研究染色體的結(jié)構(gòu)和功能。隨著顯帶技術(shù)的不斷發(fā)展完善，對(duì)細(xì)胞學(xué)、遺傳學(xué)、分類學(xué)、育種學(xué)、醫(yī)學(xué)等都有十分重要的意義。
C帶是顯帶技術(shù)中zui簡單的一種帶型。C帶的操作程序特別能使著絲粒型的異染色質(zhì)著色，這種異染色質(zhì)常位于著絲粒周圍并常含有高度重復(fù)的隨體DNA。因通常在著絲粒（centromere）處出現(xiàn)，故稱之為C帶。
關(guān)于C帶產(chǎn)生的機(jī)理，有一種說法認(rèn)為由于異染色質(zhì)部分結(jié)構(gòu)緊密且主要結(jié)合組蛋白，氫氧化鋇或其他堿性物質(zhì)處理時(shí)異染色質(zhì)區(qū)被保護(hù)而優(yōu)先提取了常染色質(zhì)區(qū)即非C帶區(qū)的DNA，致使染色體臂著色淺而異染色質(zhì)部分著色深，從而產(chǎn)生C帶。
操作中氫氧化鋇溶液處理的時(shí)間是全過程zui關(guān)鍵的一步，染色體標(biāo)本在氫氧化鋇溶液中處理時(shí)間過長，會(huì)使染色體均為淺色，反之則會(huì)染為紫色，表現(xiàn)不出分化染色。
實(shí)驗(yàn)試劑
0.2mol / L鹽酸、5%Ba(OH)2、2×SSC溶液、Giemsa染液等。
2×SSC溶液（0.3mol / L NaCL 0.03mol / L 檸檬酸鈉）：稱取NaCL117.53克和檸檬酸鈉8.8233克置于容量瓶中加至1000ml。
實(shí)驗(yàn)設(shè)備
恒溫水浴鍋、立式染色缸等。
實(shí)驗(yàn)材料
小白鼠骨髓細(xì)胞染色體標(biāo)本。
實(shí)驗(yàn)步驟
1、制片：見實(shí)驗(yàn)小白鼠骨髓細(xì)胞染色體制片技術(shù)。
2、HCl處理：室溫下，將上次實(shí)驗(yàn)未染色的小白鼠骨髓細(xì)胞染色體標(biāo)本放入0.2mol / L鹽酸溶液中處理1小時(shí)，然后水洗。
3、Ba(OH)2處理：將標(biāo)本浸于50℃的5%Ba(OH)2溶液中，處理10—30秒（隨氣溫和標(biāo)本齡而變動(dòng)）后，水洗。
4、2×SSC處理：將標(biāo)本轉(zhuǎn)入60℃的2×SSC溶液中處理1小時(shí)，水洗。
5、染色：將標(biāo)本放入Giemsa染液中染色10分鐘，水洗。
6、鏡檢：將標(biāo)本干燥后用顯微鏡高倍物鏡檢查顯帶標(biāo)本，選擇染色體分散均勻，顯帶明顯的分裂相。
注意事項(xiàng)
操作中氫氧化鋇溶液處理的時(shí)間是全過程zui關(guān)鍵的一步，染色體標(biāo)本在氫氧化鋇溶液中處理時(shí)間過長，會(huì)使染色體均為淺色，反之則會(huì)染為紫色，表現(xiàn)不出分化染色。