微生物學技術(shù)：用比濁法測定大腸桿菌的生長曲線
更新時間：2014-08-14 瀏覽次數(shù)：1671
(一)實驗目的
了解細菌生長曲線的持點及測定原理，學會用比濁法測定細菌的生長曲線。
(二)實驗原理
將一定數(shù)量的細菌，接種于適宜的液體培養(yǎng)基中，在適溫下培養(yǎng)，定時取樣測數(shù)，以菌數(shù)的對數(shù)為縱坐標，生長時間為橫坐標，作出的曲線稱為生長曲線。該曲線表明細菌在一定的環(huán)境條件下群體生長與繁殖的規(guī)律。一般分為延緩期、對數(shù)期、穩(wěn)定期及衰亡期四個時期，各時期的長短同菌種本身特征、培養(yǎng)基成分和培養(yǎng)條件不同而異。
比濁法是根據(jù)細菌懸液細胞數(shù)與混濁度成正比，與透光度成反比關(guān)系，利用光電比色計測定細胞懸液的光密度(即OD值)，用于表示該菌在本實驗條件下的相對生長量。
實驗設(shè)正常生長、加酸抑制和加富培養(yǎng)等三種處理，以了解細菌在不同生長條件下的生長情況。
（三）實驗器材
(1)活材料：大腸桿菌(E.coli)。
(2)培養(yǎng)基和試劑：牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基14支(每支10mL)，濃縮5 倍的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基1支。無菌酸溶液(甲酸：乙酸：乳酸=3：1：1)。
(3)器材：1mL無菌吸管、搖床、冰箱、光電比色計、標簽等。
（四）實驗方法
方法(1)
1)接種：取13支裝有牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)液的試管，貼上標簽(注明菌名、培養(yǎng)處理、培養(yǎng)時間、組號)。按無菌操作法用吸管向每管準確加入0.2mL的大腸桿菌培養(yǎng)液，接種后，輕輕搖蕩，使菌體混勻。另一支不接種的培養(yǎng)管注明CK(對照)。
2)培養(yǎng)：將接種后的培養(yǎng)管置于搖床上，在37℃下振蕩培養(yǎng)。其中9支培養(yǎng)管分別于培養(yǎng)的0、1．5、3、4、6、8、10、12和14h后取山，放冰箱中貯存，待測定。加酸處理。取出經(jīng)4h培養(yǎng)的另二支培養(yǎng)管，按無菌操作法加入lmL無菌酸溶液，搖勻后放回搖床上，繼續(xù)振蕩培養(yǎng)，于培養(yǎng)8h和14h后取出放冰箱中貯存，待測定。加富營養(yǎng)物處理。余下的二支培養(yǎng)管于培養(yǎng)6h后取出，按無菌操作法加入濃縮5倍的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)液1mL，搖勻后，繼續(xù)進行振蕩培養(yǎng)，于培養(yǎng)8h和14h后取出，放入冰箱中貯存，待測定。
3)比濁：將培養(yǎng)不同時間、形成不同細胞濃度的細菌培養(yǎng)液進行適當稀釋，使光密度值在0.0-0.4范圍內(nèi)，以未接種的牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基調(diào)零點，在光電比色計上，選用400-440nm波長的濾光片進行比濁，從zui稀濃度的菌懸液開始，依次測定。
方法(2)
將大腸桿菌接入裝有牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)液的小試管中(試管要能插入放比色杯的比色槽內(nèi))。37℃下振蕩培養(yǎng)，分別在0、1.5 、3、4、6、8、10、12和14h取出，以未接種培養(yǎng)液調(diào)零點，在光電比色計上比色。比色時應自制一個暗盒將培養(yǎng)管和比色槽罩住，以形成一個暗室。
（五）繪制曲線
以細菌懸液的光密度值(OD)為縱坐標，培養(yǎng)時間為橫坐標，給出大腸桿菌在正常生長、加酸處理和加富培養(yǎng)三種條件下的生長曲線。
如果我們將上述培養(yǎng)0，1.5，3，4，6，8，10，12，14h的細菌懸液用稀釋平板測數(shù)法進行測數(shù)，測出不同時間的含菌數(shù)，以菌懸液比濁的光密度值為橫坐標，以細菌的數(shù)量為縱坐標，繪制一標準曲線，這樣在測得了任一培養(yǎng)時間的菌懸液光密度值后，就可以在此標淮曲線上查出含菌數(shù)。這種方法已在工業(yè)上廣泛采用，它可以節(jié)省許多稀釋平板測數(shù)的時間， 直接用比濁法測得的光密度值查標準曲線以了解各個培養(yǎng)時期的菌數(shù)消長情況。
- (上一篇)：微生物學技術(shù)：紫外線滅菌實驗
- (下一篇)：微生物學技術(shù):PCR法檢測支原體