免疫學(xué)技術(shù)專題：斑點金免疫滲濾測定法（DIGFA）
更新時間：2014-06-03 瀏覽次數(shù)：2443
基本原理
斑點金免疫滲濾測定法是在斑點免疫滲濾測定法基礎(chǔ)上，改用膠體金標(biāo)記物代替酶，省去底物顯色的步驟。試驗方法是以硝酸纖維素膜（NC膜）為載體，將試劑及標(biāo)本滴加在膜上，通過滲濾而逐步反應(yīng)。全過程可于數(shù)分鐘內(nèi)完成，陽性結(jié)果在膜上呈紅色斑點。
試劑及材料
1. 滲濾裝置：為一塑料小盒（4x3x0.6cm），分為底、蓋兩層，蓋的中央有一個直徑0.5cm的小孔。盒底充填吸水性較強(qiáng)的墊料，蓋孔下，緊貼墊料放置一片NC膜。緊閉盒蓋，即為滲濾裝置。在孔中的NC膜上點加1-2ml特異性抗體(一抗)或抗原，室溫自然干燥，保存于放干燥劑的密封塑料袋中備用。
2. 封閉液：含0.2%BSA和0.05%吐溫-20的洗滌液。
3. 洗滌液：50mol/L，pH7.2 PBS。
4. 特異性抗體(一抗)或抗原
5. 金標(biāo)抗體
操作方法
1. 取出滲濾器，先在小孔的NC膜上，滴加2滴（約100ml）封閉液；
2. 待其滲入盒內(nèi)，在NC膜上，加待檢標(biāo)本1滴（約50ml）；
3. 待其滲入盒內(nèi)，在NC膜上，滴加2滴（約100ml）洗滌液；
4. 待其滲入盒內(nèi)，在NC膜上，加金標(biāo)抗體1滴（約50ml），使其與NC膜上吸附的檢品發(fā)生反應(yīng)；
5. 待其滲入盒內(nèi)，在NC膜上，滴加2滴（約100ml）洗滌液；
6. 至洗滌液*滲入盒內(nèi)
結(jié)果觀察
在小孔NC膜上出現(xiàn)紅色反應(yīng)時為陽性反應(yīng)，陰性反應(yīng)不著色。
注意事項
1. 特異性抗體(一抗)或抗原、待檢標(biāo)本和金標(biāo)抗體的用量事先都必須應(yīng)用方陣法確定zui適用量。
2. 盒底充填的墊料吸水性要強(qiáng)，否則影響結(jié)果。