免疫組化專題：流式細(xì)胞儀檢測技術(shù)實(shí)驗(yàn)
更新時(shí)間：2014-06-03 瀏覽次數(shù)：1916
標(biāo)簽： 流式 細(xì)胞儀
流式細(xì)胞儀（flow cytometer）是一種能夠探測和計(jì)數(shù)以單細(xì)胞液體流形式穿過激光束的細(xì)胞檢測裝置，由于在檢測中使用的細(xì)胞標(biāo)志示蹤物質(zhì)為熒光標(biāo)記物，因此，用來分離、鑒定細(xì)胞的流式細(xì)胞儀有被稱為熒光激活細(xì)胞分類儀，是分離和鑒定細(xì)胞群及亞群的一種強(qiáng)而有力的應(yīng)用工具。
實(shí)驗(yàn)方法
- 流式細(xì)胞儀
| 實(shí)驗(yàn)方法原理 | 流式細(xì)胞儀的使用一般分為三個(gè)步驟。*，是儀器前階段，包括試劑的準(zhǔn)備，細(xì)胞制備、細(xì)胞的熒光染色；第二，是流式細(xì)胞儀階段，主要是儀器的操作；第三，是結(jié)果分析階段。 |
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| 實(shí)驗(yàn)材料 | 淋巴細(xì)胞 外周血的白細(xì)胞 |
| 試劑、試劑盒 | FACS緩沖液 PBS 疊氮鈉溶液 儀器緩沖液 FACS清潔液 FACS洗凈液 |
| 儀器、耗材 | 流式細(xì)胞儀 |
| 實(shí)驗(yàn)步驟 | 一、細(xì)胞和試劑的準(zhǔn)備
4. FACS緩沖液： 1×PBS 950 ml FCS 40 ml 10%疊氮鈉溶液 10 ml
1. 單細(xì)胞懸液的制備：將1×105~1×107的細(xì)胞放入1.5 m l離心管中3000 r/min 離心5分鐘，棄上清；加入FACS緩沖液100 μl 懸浮細(xì)胞。
b.abti-CD3（2 ng/ml）檢測結(jié)果
c.abti-CD3（10 ng/ml）檢測結(jié)果
CD4及CD8細(xì)胞點(diǎn)狀二維圖結(jié)果
不同的熒光物要求選擇不同的激發(fā)波長，參見下表
（2）細(xì)胞的吸入：將裝有細(xì)胞的FACS測定管放置到機(jī)器吸管孔處。 先預(yù)檢測樣品，然后進(jìn)行實(shí)際檢測?？筛鶕?jù)細(xì)胞的濃度選擇測定的速度（低、中或高）。所有的數(shù)據(jù)將自動(dòng)存入微機(jī)。
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| 注意事項(xiàng) | 1. 減少非特異熒光染色 （1）細(xì)胞的活性和狀態(tài)：流式細(xì)胞儀不但可探測細(xì)胞表面的熒光，也可探測細(xì)胞內(nèi)的熒光。因此，如果要檢測細(xì)胞表面的分子，一定要保證細(xì)胞的活性，還應(yīng)盡可能保持細(xì)胞靜止，通常在4度進(jìn)行操作。否則，熒光抗體進(jìn)入死細(xì)胞內(nèi)，會(huì)產(chǎn)生非特異結(jié)果。
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