細(xì)胞技術(shù)專題：四唑鹽（MTT）比色實(shí)驗(yàn)
更新時(shí)間：2014-03-12 瀏覽次數(shù)：1445
標(biāo)簽： 四唑鹽 MTT 比色
MTT法建立于20世紀(jì)80年代初，是一種通過測(cè)定細(xì)胞能量代謝水平用以間接反映細(xì)胞增殖情況的檢測(cè)方法。它基于兩個(gè)假設(shè)：1、只有活細(xì)胞能夠?qū)TT還原成為難溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶物，而死細(xì)胞不能達(dá)到；2、其吸光度與活細(xì)胞數(shù)量成直線正相關(guān)。
實(shí)驗(yàn)方法
- MTT法
| 實(shí)驗(yàn)方法原理 | 活細(xì)胞的線粒體中的琥珀脫氫酶能使外源性的MTT還原為難溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶物并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無此功能。二甲基亞砜能溶解細(xì)胞中的紫色結(jié)晶物，用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在490 nm 波長處測(cè)定其光吸收值，可間接反映細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶物形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。 |
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| 實(shí)驗(yàn)材料 | 細(xì)胞 |
| 試劑、試劑盒 | D-Hanks液 牛血清 RPMI1640 雙抗 0.08%胰酶 |
| 儀器、耗材 | 凈化工作臺(tái) 離心機(jī) 恒溫水浴箱 冰箱 倒置相差顯微鏡 培養(yǎng)箱 吸管 玻璃瓶 培養(yǎng)瓶 廢液缸 吸頭 槍頭 膠塞 離心管 量加樣槍 紅血球計(jì)數(shù)板 |
| 實(shí)驗(yàn)步驟 | 一、接種細(xì)胞
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| 注意事項(xiàng) | 1. 選擇適當(dāng)?shù)募?xì)胞接種濃度。在進(jìn)行MTT試驗(yàn)前，對(duì)每一種細(xì)胞都應(yīng)測(cè)其貼壁率、倍增時(shí)間以及不同接種細(xì)胞數(shù)條件下的生長曲線，然后確定試驗(yàn)中每孔的接種細(xì)胞數(shù)和培養(yǎng)時(shí)間。
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