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技術(shù)文章細(xì)胞技術(shù)專(zhuān)題：神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)
更新時(shí)間：2014-03-03 瀏覽次數(shù)：1260
標(biāo)簽： 神經(jīng) 膠質(zhì)
神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)可以：（1）獲得神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞；（2）用于神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞電生理特性，如膜電位、去極化等；（3）用于免疫應(yīng)答研究。
實(shí)驗(yàn)方法
- 酶消化法
- 胰蛋白酶消化法
| 實(shí)驗(yàn)材料 | 大鼠 |
|---|---|
| 試劑、試劑盒 | CMF-Hanks液 胰蛋白酶 DMEM F12 |
| 儀器、耗材 | 水浴鍋 培養(yǎng)箱 |
| 實(shí)驗(yàn)步驟 | 一、原代培養(yǎng) 2. 解剖顯微鏡下，剝離腦膜，切除大腦髓質(zhì)部分。 3. 將大腦皮質(zhì)在無(wú)Ca2+、Mg2+Hanks液(CMF-Hanks液)中剪碎。 4. 室溫下靜置10 min。 5. 在37℃水浴箱中用0.125%的胰蛋白酶(用CMF-Hanks液配制)消化30 min。 6. 加入少許含20%血清的DMEM/F12(DMEM與F12為1:1)混合培養(yǎng)液(下同)，用吸管稍加吹打至胰酶液與培養(yǎng)液混勻。離心5 min(1 000 r/min)。 7. 吸去上清含酶液，重新加入含血清培養(yǎng)液，用吸管反復(fù)吹打至組織塊消散為止。制成細(xì)胞懸液(暫稱(chēng)初細(xì)胞懸液)。 8. 將初細(xì)胞懸液接種到玻璃瓶(或培養(yǎng)皿)中，于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中孵育30 min。 9. 翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶,吸出瓶中的細(xì)胞懸液。用孔徑為75μm的不銹鋼網(wǎng)過(guò)濾。 10. 將濾過(guò)液離心10 min(1 000 r/min)，濃縮成約3ml的細(xì)胞懸液(暫稱(chēng)為次細(xì)胞懸液)。 11. 將次細(xì)胞懸液種植到預(yù)先涂布有多聚賴(lài)氨酸的培養(yǎng)瓶中。接種的細(xì)胞密度約1×104個(gè)/cm2。 12. 置CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3-5h,再補(bǔ)加足夠的培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)9-14 h。培養(yǎng)液顏色略微變黃時(shí)換液。
1. 吸取舊培養(yǎng)液用CMF-Hanks液洗滌2次。 2.加入少許0.125%的胰蛋白液消化15 min。以有血清培養(yǎng)液終止胰酶活性。 3.稍事手動(dòng)搖晃,倒掉含酶液。加入有血清培養(yǎng)液。 4.用吸管反復(fù)吹打使細(xì)胞從培養(yǎng)瓶壁脫落。收集細(xì)胞懸液,離心10 min(1 000 r/min)。棄上清液，給細(xì)胞沉淀物再加入培養(yǎng)液制成細(xì)胞懸液。 5.重復(fù)原代培養(yǎng)時(shí)8-10步。 6.將細(xì)胞懸液按0.5×105個(gè)/cm2的密度種植在經(jīng)鼠尾膠原包被的培養(yǎng)瓶中。 7.送入CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3-5 h，再加足夠的培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)。
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