細(xì)胞技術(shù)專題：大鼠肝星狀細(xì)胞原代培養(yǎng)實驗
更新時間：2014-02-25 瀏覽次數(shù)：1548
標(biāo)簽： 大鼠 肝星狀細(xì)胞 原代培養(yǎng)
大鼠肝星狀細(xì)胞原代培養(yǎng)可以：（1）用于細(xì)胞保種；（2）用于分子生物學(xué)研究；（3）用于基因治療研究。
實驗方法
- 胰酶消化法
| 實驗方法原理 | 將小鼠的肝細(xì)胞從機體中取出，經(jīng)胰酶、螯合劑（常用EDTA）處理，分散成單細(xì)胞，置合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細(xì)胞得以生存、生長和繁殖。 |
|---|---|
| 實驗材料 | SD大鼠 |
| 試劑、試劑盒 | 戊巴比妥鈉 小牛血清 DMEM 酶消化液 D-Hanks' 液 酚紅 臺盼蘭 HBSS 氯化鈉 PBS |
| 儀器、耗材 | 手術(shù)刀 手術(shù)剪 尼龍網(wǎng) 相差顯微鏡 熒光顯微鏡 |
| 實驗步驟 | 一、實驗材料準(zhǔn)備 2. 試劑：戊巴比妥鈉，小牛血清(或胎牛血清，則更好)，DMEM，酶消化液I、Ⅱ(以HBSS配)，18% Nycodenz(以GBSS配)，D-Hanks' 液(KCl 0.4 g/L，KH2PO4 0.06 g/L，NaCl 8.0 g/L，NaHCO3 0.35 g/L，Na2HPO4.7H2O 0.06 g/L或Na2HPO4 0.053 g/L，可加酚紅 0.02 g/L)，HBSS，臺盼蘭等。 3. 器械：手術(shù)器械，200目尼龍網(wǎng)，相差顯微鏡，熒光顯微鏡。 二、原代培養(yǎng)方法 1. 大鼠腹腔麻醉后在超凈臺上剖腹，進行門靜脈插管，以D-Hanks'液灌注，同時剪開下腔靜脈，沖掉血液后，改灌以100 ml酶消化液I(0.05% IV型膠原酶)。 三、傳代方法 四、 結(jié)果 接種次日，光鏡下可見細(xì)胞呈星芒狀，胞質(zhì)內(nèi)有脂滴，熒光鏡下328 nm處見自發(fā)熒光。附上發(fā)表于Biochem Biophys Res Commun 2004年文章的照片(圖1)。
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| 注意事項 | 1. 進一步鑒別需要做免疫組化：Desmin和α-SMA；后者在細(xì)胞激活后才表達(dá)。 |
| 其他 | 一、參考文獻(xiàn) 1. 袁桃霞，張錦生，張月娥，等. 大鼠肝Ito細(xì)胞的體外培養(yǎng)及肝素對其抑制作用的觀察. 上海醫(yī)科大學(xué)學(xué)報 1996;23(2):90-93. 2. Huang GC, Zhang JS, Tang . Involvement of C/EBP-α gene in in vitro activation of rat hepatic slate cells. Biochem Biophys Res Commun 2004;324(4):1309-1318. |
