細胞技術(shù)專題：腫瘤細胞原代培養(yǎng)實驗
更新時間：2014-02-25 瀏覽次數(shù)：1595
標簽： 腫瘤 細胞 原代培養(yǎng)
腫瘤細胞原代培養(yǎng)可以：（1）研究癌變機理；（2）研究抗癌藥檢測；（3）研究癌分子生物學；（4）用于闡明和解決癌癥。
詳細
實驗方法
- 組織塊法
- 酶消化法
- 脫落細胞法
| 實驗方法原理 | 腫瘤細胞的原代培養(yǎng)與正常細胞的原代培養(yǎng)的條件基本相似。一般常用原代細胞的基礎(chǔ)培養(yǎng)基，10%血清濃度即可，在原代培養(yǎng)時需加入原代細胞培養(yǎng)的特制添加物，或原患者血清（1%-2%）以利細胞生長。用細胞生長因子如胰島素、松、雌激素等等。也可以考慮動物媒介培養(yǎng)。根據(jù)細胞種類不同選用不同的促細胞生長因子。 |
|---|---|
| 實驗材料 | 瘤組織 |
| 試劑、試劑盒 | Hanks液 |
| 儀器、耗材 | 平皿 培養(yǎng)瓶 恒溫箱 |
| 實驗步驟 | 一、將取得的瘤組織去除脂肪、結(jié)締組織及壞死部分。 |
| 其他 | 一、對腫瘤細胞系或細胞株的評價 已建成的各種腫瘤細胞系或細胞株，無疑都是可用的實驗對象。近年我國已建成的腫瘤細胞系已非常多，并獲得越來越廣泛的應用。但根據(jù)研究者的經(jīng)驗，在使用這些細胞系時，應持特別審慎態(tài)度，主要是應考慮到這些細胞在長期傳代中有否發(fā)生遺傳性改變的可能。*，長期傳代細胞系染色體核型常是不穩(wěn)定的。另外也可能發(fā)生如基因突變、基因易位或缺失等變化。其結(jié)果可能導致細胞產(chǎn)生生物學性狀上的變動。 以近年建成的各種腫瘤細胞系為例，都已傳代少則幾十，多則百代以上后，才確認建成了細胞系。這種情況下很難保證細胞從初代到建成時的性狀仍是一致的。已如前述，癌細胞在培養(yǎng)中并非能很順利地傳下去，凡已長期傳代的細胞系，都已獲得不死性。當前尚未*確證所有癌細胞都具有不死性；因此尚難肯定在長期培養(yǎng)中的癌細胞的生物學性狀與體內(nèi)時仍*相同（包括不死性）。據(jù)上述對用癌細胞系所獲實驗結(jié)果應盡量做分析性的結(jié)論，避免做概括性的與體內(nèi)等同的結(jié)論，外推與體內(nèi)等同更是不妥的。廣泛來說，應用各種較長時間培養(yǎng)細胞做實驗時，都應如此。 根據(jù)人們的經(jīng)驗，腫瘤細胞在體外不易培養(yǎng)，建立能傳代的腫瘤細胞系更為困難。當腫瘤組織或細胞初代接種培養(yǎng)后，常出現(xiàn)以下幾種情況： 1. *無細胞游出或移動； 2. 有細胞移動和游出，但無細胞增殖，細胞長時間處于停滯狀態(tài)以致難以傳代； 3. 有細胞增殖，傳若干代后停止生長或衰退死亡； 4. 傳數(shù)代后細胞增殖緩慢，經(jīng)過一段停滯期后，才又呈旺盛生長狀態(tài)，形成穩(wěn)定生長的腫瘤傳代細胞系。 以上現(xiàn)象說明腫瘤細胞對體外生存條件有較高的要求，并需經(jīng)過對新環(huán)境的適應才能生長，因此欲獲得好的培養(yǎng)效果，不能局限于一般培養(yǎng)法，必須采用一些特殊的措施。 1. 適宜底物 把經(jīng)過純化的細胞接種在不同的底物上，如鼠尾膠原底層、飼細胞層等。 2. 生長因子 應用促細胞生長因子，向培養(yǎng)液中增加一種或幾種促細胞生長因子。根據(jù)細胞種類不同選用不同的促生長物，常用有胰島素、、雌激素以及其它生長因子。 為提高腫瘤細胞對體外培養(yǎng)環(huán)境的適應力和增加有活力癌細胞（干細胞）的數(shù)量，可采用動物體轉(zhuǎn)嫁接種成瘤后，再從動物體內(nèi)取出進行培養(yǎng)，能提高體外培養(yǎng)的成功率。受體動物以裸鼠。 3、動物體媒介培養(yǎng)方法 （1）瘤塊接種：取新鮮瘤組織，用 Hanks液洗凈血污，切成 1～3毫米小塊，用穿刺針頭吸一小瘤塊，用酒精棉球擦拭動物腹部后，直接刺入皮下，注入瘤塊。 （2）飼養(yǎng)觀察，待腫瘤生長達較大體積后，剝?nèi)〕隽鼋M織。 （3）進行體外培養(yǎng)。 （4）為防止失敗，仍取部分瘤組織繼續(xù)在裸鼠體內(nèi)傳代。通過裸鼠媒介接種，有活力的腫瘤細胞數(shù)量增多，細胞培養(yǎng)易于成功。
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