生物化學(xué)技術(shù)專題：微生物的糖發(fā)酵
更新時(shí)間：2014-01-07 瀏覽次數(shù)：1465
一、單糖發(fā)酵試驗(yàn)
(一)、實(shí)驗(yàn)原理
單糖發(fā)酵是將葡萄糖，乳糖或麥芽糖等分別加入蛋白胨水培養(yǎng)基內(nèi)，使其zui終濃度為 0.75~1％。并加入一定量酚紅指示劑及小倒管，制成單糖發(fā)酵管，接種細(xì)菌經(jīng)37℃培養(yǎng)18~24小時(shí)，若能分解糖產(chǎn)酸則酚紅指示劑由紅變黃，若能分解 甲酸有CO2和H2等氣體形成，小倒管內(nèi)則聚集有氣泡；不分解，則指示劑不變色。
(二)、實(shí)驗(yàn)材料
1．菌種：大腸桿菌，傷寒桿菌18~24小時(shí)瓊脂斜面培養(yǎng)物。
2．培養(yǎng)基：葡萄糖發(fā)酵管，乳糖發(fā)酵管等。
(三)實(shí)驗(yàn)方法
1．將傷寒桿菌，大腸桿菌按照液體接種方法分別接種于葡萄糖及乳糖發(fā)酵管內(nèi)。
2．置37℃孵箱培養(yǎng)18~24小時(shí)。
3． 觀察結(jié)果：由于一些細(xì)菌能分解某種糖類產(chǎn)酸，所以培養(yǎng)基中PH下降到7.0以下，在酚紅指示劑的顯示下，培養(yǎng)基顏色由紅變黃。產(chǎn)酸者以“+”表示，如果同 時(shí)產(chǎn)生氣體，則培養(yǎng)基中小倒管內(nèi)有氣泡出現(xiàn)，此乃產(chǎn)酸又產(chǎn)氣，以“⊕”表示，不分解，則指示劑不變色，用“-” 表示。
(四)、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
傷寒桿菌 大腸桿菌
葡萄糖 + ⊕
乳 糖 - ⊕
二、V-P(Voges-Proskauer)試驗(yàn)
(一)、實(shí)驗(yàn)原理
有些細(xì)菌如產(chǎn)氣桿菌，分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸脫羧，生成乙酰甲基甲醇，在堿性環(huán)境中被氧化為二乙酰，再與培養(yǎng)基內(nèi)胍基結(jié)合，生成紅色化合物，V—P試驗(yàn)陽(yáng)性。
(二)、實(shí)驗(yàn)材料
1．菌種：大腸桿菌，產(chǎn)氣桿菌18~24小時(shí)瓊脂斜面培養(yǎng)物。
2．培養(yǎng)基：葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基。
3．試劑：V-P試劑[40％氫氧化鉀水溶液(內(nèi)含0.3％肌酸)和6%α-奈酚酒精溶液]。
(三)實(shí)驗(yàn)方法
1. 分別接種大腸桿菌，產(chǎn)氣桿菌于兩支葡萄糖蛋白胨水中。
2. 置37℃培養(yǎng)48小時(shí)后，取出分別加入KOH1ml和α-奈酚溶液1ml ,搖勻，靜置試管架上5~15分鐘。
(四)、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
培養(yǎng)液變?yōu)榧t色為陽(yáng)性，不變色為陰性。
三、甲基紅試驗(yàn)
(一)、實(shí)驗(yàn)原理
某 些細(xì)菌如大腸桿菌等分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，繼而分解為甲酸、乙酸、乳酸等，使培養(yǎng)基PH值降至4.5以下，加入甲基紅指示劑呈紅色，此為陽(yáng)性反應(yīng)；若產(chǎn)酸 量少或產(chǎn)生的酸進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為醇、醛、氣體和水等，則培養(yǎng)基的酸堿度仍在PH 6.2以上，加入甲基紅指示劑呈現(xiàn)黃色，為陰性反應(yīng)。
(二)、實(shí)驗(yàn)材料
1. 菌種：大腸桿菌，產(chǎn)氣桿菌18~24小時(shí)瓊脂斜面培養(yǎng)物。
2. 培養(yǎng)基：葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基。
3. 試劑：甲基紅試劑。
(三)實(shí)驗(yàn)方法
1. 分別將大腸桿菌，產(chǎn)氣桿菌接種于兩支葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中。
2. 置37℃培養(yǎng)2~3天取出，分別滴加甲基紅試劑2~3滴，混勻，觀察結(jié)果。
(四)、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
大腸桿菌：+，產(chǎn)氣桿菌：-。
四、枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)
(一)、實(shí)驗(yàn)原理
枸 櫞酸鹽培養(yǎng)基系一綜合性培養(yǎng)基，其中枸櫞酸鈉為*碳源，磷酸二氫銨為*氮源。一般細(xì)菌能利用磷酸二氫銨作為氮源，但不一定能分解枸櫞酸鹽取得碳源。因 此，根據(jù)可否利用枸櫞酸鹽來(lái)鑒別細(xì)菌，如產(chǎn)氣桿菌可利用枸櫞鹽作為碳源，細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖，形成菌苔，分解枸櫞酸鹽生成堿性碳酸鹽，使培養(yǎng)基PH上升到7.0 以上，由綠色變?yōu)樯钐m色，為枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)陽(yáng)性；而大腸桿菌則不能分解枸櫞酸鹽，得不到碳源，不能生長(zhǎng)，無(wú)菌苔形成，培養(yǎng)基顏色不發(fā)生變化，為枸櫞酸鹽 利用試驗(yàn)陰性。
(二)、實(shí)驗(yàn)材料
1. 菌種：大腸桿菌，產(chǎn)氣桿菌18~24小時(shí)瓊脂斜面培養(yǎng)物。
2. 培養(yǎng)基：枸櫞酸鹽斜面。
(三)實(shí)驗(yàn)方法
1. 分別將大腸桿菌，產(chǎn)氣桿菌接種于兩支枸櫞酸鹽斜面培養(yǎng)基。
2. 置37℃恒溫培養(yǎng)24小時(shí)后觀察結(jié)果。
(四)、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
產(chǎn)氣桿菌：+（有菌苔生長(zhǎng)，培養(yǎng)基變色）
大腸桿菌：-（無(wú)菌苔生長(zhǎng)，培養(yǎng)基不變色）