動物實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)知識系列：飼料、飲水及飼養(yǎng)環(huán)境
更新時(shí)間：2013-09-04 瀏覽次數(shù)：2333
做動物實(shí)驗(yàn)，zui先要做的事情就是要養(yǎng)好動物。掌握好動物飼料、飲水及其生活環(huán)境，這對于動物實(shí)驗(yàn)的成功是zui基本的保證。這是看似一個平常，但卻有著不少細(xì)節(jié)的問題。為了本版廣大站友能在整體上提高對實(shí)驗(yàn)動物飼養(yǎng)的認(rèn)識，做好動物實(shí)驗(yàn)的*步，特此開設(shè)本貼討論動物飼養(yǎng)的問題。希望大家能踴躍參與，以更多的實(shí)例來充實(shí)、豐富本貼。
擬分以下幾個方面來討論：
實(shí)驗(yàn)動物的選擇概述
實(shí)驗(yàn)動物如何辨雌雄
實(shí)驗(yàn)動物的適應(yīng)性飼養(yǎng)
實(shí)驗(yàn)動物的飼料（普通飼料、特殊飼料）
實(shí)驗(yàn)動物的飲水
實(shí)驗(yàn)動物的籠具
實(shí)驗(yàn)動物的墊料
實(shí)驗(yàn)動物的飼養(yǎng)環(huán)境
實(shí)驗(yàn)動物的護(hù)理（造模后）
貼子中如有不當(dāng)之處，請大家不吝指出！
*、實(shí)驗(yàn)動物的選擇。
實(shí)驗(yàn)動物如何選擇？這個問題對于藥理和實(shí)驗(yàn)動物專業(yè)的朋友來說，不是難事。但對于需要做動物實(shí)驗(yàn)的其它專業(yè)的朋友來說，有時(shí)候會感到茫然。或者沒有自己的思考，照抄別人的做法。對于這一部分站友，我們不可能要求去系統(tǒng)學(xué)習(xí)《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動物學(xué)》，但我們可以常備一本在身邊。在需要用的時(shí)候翻一翻，將會使你豁然開朗。因?yàn)闀斜容^詳細(xì)地介紹了常用實(shí)驗(yàn)動物的解剖生理、生物學(xué)習(xí)性等等，zui主要的是它為你選擇什么樣的實(shí)驗(yàn)動物提供了重要的參考。
因此，系統(tǒng)學(xué)習(xí)或者零星地翻閱《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動物學(xué)》是保證合理選用實(shí)驗(yàn)動物的基礎(chǔ)之一。再者就是要參考大量文獻(xiàn)。在此，我不想對這一問題全面展開，只是提幾點(diǎn)原則和方法。
*，做什么樣的實(shí)驗(yàn)？什么動物適合本實(shí)驗(yàn)？ 做什么實(shí)驗(yàn)，這是選題時(shí)就確定好了的?？隙ㄊ墙?jīng)過論證的。無需多講。 用什么樣的動物呢？我想，大多是參照文獻(xiàn)，再結(jié)合自己對實(shí)驗(yàn)動物的了解。選題之時(shí)就肯定閱讀過很多文獻(xiàn)了，因此不會陌生。如：做高血脂、動脈粥樣硬化，我想大多數(shù)人會選擇大鼠、兔子，也可以選金黃地鼠、鵪鶉，少數(shù)人會選小鼠，但我想用狗和猴的基本上不會有吧。因?yàn)橐x擇比較容易形成此疾病的動物，且要易得。 所以，對于不太熟悉的人來說，要多看文獻(xiàn)，參考別人是如何選擇的。就算是對動物比較了解，系統(tǒng)學(xué)過這方面知識的，也要多看文獻(xiàn)，綜合權(quán)衡。切忌隨意地憑空想像。
第二，采取什么樣的方法造模？ 做動物實(shí)驗(yàn)通常是要造模的。選擇什么樣的方式？這要從實(shí)驗(yàn)的目的及條件入手。造糖尿病，可以用手術(shù)，也可以用藥物。其中藥物有四氧嘧啶及鏈脲佐菌素（STZ）。后者用得較多，且為認(rèn)同。而四氧嘧啶目前用得較少了。造模方法一是參照《藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》，二是參照文獻(xiàn)。造模方法有時(shí)也決定了你的動物選擇。像做手術(shù)造動脈粥樣硬化，我想用大鼠比小鼠來得方便吧？
第三，經(jīng)費(fèi)承受能力如何？ 做實(shí)驗(yàn)也要精打細(xì)算。不可能為了所謂的高水平、技術(shù)而不顧實(shí)驗(yàn)室的條件。像做高脂動物模型，假設(shè)經(jīng)費(fèi)只有一萬多元，一定要弄個敲除APoE基因的小鼠來做，恐怕沒人認(rèn)同。做一個簡單的鎮(zhèn)痛抗炎實(shí)驗(yàn)，你非得要用SPF實(shí)驗(yàn)室，這也是不太實(shí)際的，也是沒必要的。就像一個剛剛能滿足溫飽的人突然要花上很多錢去國外旅游一樣，是不切實(shí)際的。因此，實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)讓我們有時(shí)不能達(dá)到理想的狀態(tài)。但是，科研并不一定是要用的技術(shù)、的動物，而是要能解決問題。能用簡單的技術(shù)、普通的動物解決問題的，就不必去盲目追求更高。過于理想化、不考慮經(jīng)費(fèi)問題，是不少研究生初涉實(shí)驗(yàn)時(shí)的通病。
第四，多了解一下實(shí)驗(yàn)中可能出現(xiàn)的問題。有不少人做實(shí)驗(yàn)時(shí)根本沒有考慮可能出現(xiàn)的失誤，因而在實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)問題時(shí)茫然無措。即使是造同樣的疾病模型，不同的動物表現(xiàn)可能有不一樣的地方。要對這些問題有充分的了解，并要進(jìn)行必要的預(yù)試。要了解動物的習(xí)性，并進(jìn)行必要的護(hù)理。 因此，在你決定了選擇何種動物，以何種方式造模之后，實(shí)際上，你就要對整個實(shí)驗(yàn)過程有全面的計(jì)劃，并對可能出現(xiàn)的問題有應(yīng)對的措施。
第二、實(shí)驗(yàn)動物如何辨雌雄？
這個問題應(yīng)該是每個初涉動物實(shí)驗(yàn)的人完*全掌握的，是不容許有任何一點(diǎn)差錯的。 如何辯？當(dāng)然是看生殖器了。一般大動物好辯，像狗，猴等；小動物及中等大小的體型的難辨一點(diǎn)，如：小鼠、大鼠、兔?？捎邢铝蟹椒▉龛b別：
1. 看肛門與生殖器之間的距離：雄性隔得遠(yuǎn)，雌性隔得近。雄的生殖器與肛門間有陰囊，不過幼齡時(shí)不太明顯。
2. 雄性陰莖朝頭的方向突出，可輕輕擠壓包皮使其露出而確認(rèn)。雌性較小時(shí)可見閉合的陰道口，擠壓亦可張開。像兔、豚鼠等，陰莖短小，故較難辨認(rèn)。是擠壓生殖器以確認(rèn)?？吹檬炀毩?，其實(shí)也不難。生殖器處呈O型者，為公的；生殖器處呈V型，下端裂縫延至肛門者，為母的。這主是針對幼齡的動物而言。
3. 看乳頭或睪丸。成年的動物比較好辯認(rèn)。母的有乳頭，雄的有睪丸。但在比較小的時(shí)候，乳頭，睪丸并不是那么明顯的。
辨雌雄的目的就是為了分籠飼養(yǎng)，避免雌雄同籠而交配，無法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。不過，即使是同性的放在一籠，有些細(xì)節(jié)仍值得注意。 說一個小插曲：本人有一次將兩批做實(shí)驗(yàn)剩下的小鼠弄到一個籠里。結(jié)果發(fā)現(xiàn)大的小鼠不斷追逐小的小鼠，且試圖交配。一師妹在旁說，是不是我弄了只雌的進(jìn)去了？我仔細(xì)檢查了一下，根本沒有弄錯。放回去，過了一會兒又發(fā)現(xiàn)如此現(xiàn)象。后來我想可能是因?yàn)榇蟮男∈螅?5ｇ～30ｇ）已*性成熟，在找不到雌性的情況下來追小的雄性小鼠（15ｇ～18ｇ）以獲得性的滿足。這豈不成了“同性戀”？因此，動物的日齡相差太大的不要放在同一個籠里，以免發(fā)生上述現(xiàn)象。當(dāng)然，一般而言，一個籠子養(yǎng)多個動物的主要是小鼠、大鼠、豚鼠、金黃地鼠等小動物，像兔子、狗一般都是一個籠子一只。 剛開始一定要認(rèn)真仔細(xì)地觀察，這樣會有一些經(jīng)驗(yàn)。熟悉以后，可以很迅速很準(zhǔn)確的分出來。對初學(xué)者而言，我建議用第2種方法予以確認(rèn)。 一般提供商將動物送來時(shí)，都是已經(jīng)分好了雌雄的。但我們?nèi)砸H自進(jìn)行確認(rèn)。一旦有一只混入異性群中，可能給實(shí)驗(yàn)帶來極大的影響，甚至前功盡棄。
第２種方法的示意圖如下：（不僅是大、小鼠，也適合于兔、豚鼠等的性別鑒定）
第三 、 實(shí)驗(yàn)動物的適應(yīng)性飼養(yǎng)
所謂適應(yīng)性喂養(yǎng)，是指實(shí)驗(yàn)動物由繁殖地或供應(yīng)商處搬到實(shí)驗(yàn)動物房以后，在實(shí)驗(yàn)之前，為了使之適應(yīng)環(huán)境而喂養(yǎng)幾天的過程。這一過程非常重要，卻往往不受人重視。 這一過程一般至少為期三天，是一周。
為什么要進(jìn)行適應(yīng)性喂養(yǎng)？
1. 因?yàn)閯游飶囊粋€地方進(jìn)入到新的環(huán)境之后，它們要自行調(diào)整一下，才能適應(yīng)。就像中國隊(duì)員到外國踢足球要倒時(shí)差一樣，動物們也要調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)。因?yàn)檫\(yùn)輸、轉(zhuǎn)移過程中，動物原有的自身節(jié)律受到了影響，需要恢復(fù)或適應(yīng)新的節(jié)律。
2. 在適應(yīng)性喂養(yǎng)期間可密切觀察動物是否健康？如果動物運(yùn)來之時(shí)就帶有疾病，則可能在此期間表現(xiàn)出來。這讓我們對此有一個緩沖期。不至于拿有病的動物匆匆忙忙在做實(shí)驗(yàn)。雖然不是所有有病的動物都在這幾天看得出來，但這幾天確實(shí)給了我們一個重要的參考。
怎樣使之適應(yīng)？
1. 配置好飼料、飲水、墊料，做好通風(fēng)，12h-12h明暗交替。努力使之在“新家”舒服地過好日子。
2. 密切觀察其毛發(fā)、排泄物、活動情況。這是考察動物是否有病的外在表現(xiàn)。
3. 注意與實(shí)驗(yàn)室原有飼養(yǎng)的動物隔開一定的距離。其它動物的聲音、排泄的氨對新來的動物有一定的影響。 如發(fā)現(xiàn)動物有個別狀態(tài)不佳者，應(yīng)立即隔離，并分析原因。有三分之一以上狀態(tài)不佳者，高度懷疑動物有疾病。有死亡者，高度懷疑此批動物有問題。
適應(yīng)性喂養(yǎng)，是保證實(shí)驗(yàn)成功的前提之一。在此期間發(fā)現(xiàn)動物有病者，應(yīng)更換別的批次動物。也有的是實(shí)驗(yàn)動物體重尚達(dá)不到實(shí)驗(yàn)所要求的大小，這種情況下可適當(dāng)延長適應(yīng)性喂養(yǎng)的時(shí)間。
第四、實(shí)驗(yàn)動物的飼料。
飼料是一個很重要的方面。我們要了解常用實(shí)驗(yàn)動物基本的飼料組成。同時(shí)，也要了解造一些疾病模型所需的飼料組份（如：高脂模型，缺鐵性貧血模型等）。因此，下面分普通飼料和特殊飼料兩部分來講。
A 普通飼料
以常用的實(shí)驗(yàn)動物為例，我們來討論一下它們飼料的組成。
一是小鼠、大鼠的飼料。以玉米、大豆、麩皮、魚粉為主，輔以復(fù)合維生素、骨粉、微量元素。一般做成長圓柱狀形?；蛟淮职粜?。直徑在1cm左右。這樣的飼料又稱為顆粒飼料（本人覺得此名稱不妥，是否可稱為“條狀飼料‘、“棒狀飼料”？）。顏色一般為大豆黃色。小鼠、大鼠的飼料為全價(jià)飼料，即不需要再添加任何營養(yǎng)成分。
二是豚鼠、兔子的飼料。以苜蓿、玉米、大豆、麩皮、魚粉為主，輔以復(fù)合維生素、骨粉、微量元素。與小鼠、大鼠的飼料相比，主要是苜蓿的比例達(dá)到了40%左右。一般做成細(xì)長圓柱形?；蛟患?xì)棒形。直徑在0.3cm左右。顏色呈帶一點(diǎn)斑駁的青色。豚鼠、兔子的飼料成份基本一樣，只是比例略有不同，一般可以共用。因二者不能自身合成維生素C，所以苜蓿粉的比例較大。但，飼料是加水潤濕后，經(jīng)高溫高壓而制成，維C及酶類等已部分破壞。豚鼠、兔子飼料不是全價(jià)飼料。因此，在飼料之外，仍要加少許青菜或青草，否則有的狀態(tài)不佳甚至死亡。本人也曾用在飲水中加維C片的方法，但效果似不如直接給予青菜。
三是狗的飼料。以肉粉、玉米、大豆、麩皮、魚粉為主，輔以復(fù)合維生素、骨粉、微量元素。有膨化飼料。一般要增加肉類食物。
四是猴的飼料。猴為雜食性。喂以混合精飼料并輔以蘋果、葫蘿卜。混合精飼料組成：玉米粉60%,谷粉２０％，面粉１５％，黃豆粉５％，再加上骨粉、魚粉、糖、食鹽、維生素等。幼齡動物通常要加上奶粉。以前常以上述組分加水混合，做成塊狀，烘干，但現(xiàn)在有膨化顆粒飼料出售。
對于小鼠，每日的飼料在4~8g，大鼠在15~20g；豚鼠在15~30g。兔在30~80g/kg／天。注意他們的嚙齒類動物行為，就是喜歡咬東西。因?yàn)樗鼈兊难例X終生生長，于是它們要磨牙。這樣，投予過多飼料它們也會浪費(fèi)掉。兔雖屬兔型目，但有類似嚙齒目動物的行為。
下圖中所示是一些實(shí)驗(yàn)動物飼料配方的百分比（％）。
B 特殊飼料
這里主要是指一些用于造模的飼料。
1. 高脂飼料
這可能是zui常用的一種造模飼料。主要原理是通過外源性膽固醇、三酯的攝入形成高血脂、動脈粥樣硬化動物模型。zui常用的動物是大鼠、兔、金黃地鼠。也有用其它動物的，但通常以糊劑、乳劑灌胃來造模。
下面我們來談?wù)劯咧暳系呐渲啤?/span>
常用配方：豬油 10% 雞蛋黃 5% 膽固醇 1~2% 丙基硫氧嘧啶 0.2% 普通飼料 82.8~83.8% 另可酌加膽酸鹽 0.2% 左右，維生素D3等。
原理：豬油富含三酯；雞蛋黃是天然食物中含膽固醇zui高的；丙基硫氧嘧啶有助于成模，因甲狀腺素促進(jìn)膽固醇的分解，而丙基抑制其作用；膽酸鹽主要是促進(jìn)膽固醇的吸收；維生素D３主要是促進(jìn)動脈粥樣硬化形成。
制法：膽固醇鱗片狀，研細(xì)；丙基研細(xì)；二者充分混合。取雞蛋煮熟，剝?nèi)〉包S，捏碎，吹干，研成細(xì)粉，與前二者混合好。如要加膽酸鹽、維生素D３，亦將其混合好。然后以“等量遞增法”將上述藥料加入到普通飼料粉末中。再將豬油化開，噴灑在飼料粉末之中混勻?；旌弥髧娺m量水為黏合劑，加到制粒機(jī)中制成棒狀飼料。
在此，特別提出“等量倍增法”。因上述造模藥料與普通飼料的量相差懸殊，直接加入其中是難以混勻的。這樣會造成以后動物攝入的造模的膽固醇，三酯差異大，不利于實(shí)驗(yàn)。所謂“等量遞增法”就是：將上述藥料入差不多相等的普通飼料粉末充分混勻；得混合物后，再加與此混合物相等量的普通飼料混合，充分混勻；如此類推。比如：藥料為200g，*次混合后即為400g，第二次混合后為800g…這樣就成倍地混合好。因此，又稱為“等量倍增法”。因?yàn)橄嗟攘康牟煌镔|(zhì)混合時(shí)，相互混入對方的機(jī)率zui大，zui容易混勻。學(xué)過藥劑的朋友們是非常熟悉的，這在中藥的散劑中就是這樣做的。沒學(xué)過這個方法的朋友要特別關(guān)注。
目前有些飼料供應(yīng)商稱可以提供現(xiàn)成的高脂飼料。一則他們很多根本就是胡亂地加入其中的，極不均勻，嚴(yán)重影響實(shí)驗(yàn)。二則他們做的飼料中造模藥的比例不一定符合你的要求。很少有人懂得“等量倍增法”的原理及實(shí)用價(jià)值。因?yàn)槟壳帮暳闲袠I(yè)中專業(yè)人士多不會在一線，而是做管理工作。做飼料的多是沒有專業(yè)知識，而只是稍加培訓(xùn)甚至沒有培訓(xùn)的普通工人。當(dāng)然，“等量倍增”的做法很簡單，關(guān)鍵是要有這樣的專業(yè)意識。做此飼料時(shí)，全程跟蹤，這樣才會對實(shí)驗(yàn)結(jié)果心中有數(shù)。
在此，我一而再，再而三地強(qiáng)調(diào)“等量倍增法”配制飼料，就是為了站友們減少在此類實(shí)驗(yàn)中的誤差。因?yàn)?，有人問我，為什么他們的高脂組有些動物的血脂幾乎跟正常組沒有顯著差異，而有的又高很多，標(biāo)準(zhǔn)差如此地大？我*時(shí)間想到的就是飼料的配制是否有問題。如果飼料沒配好，實(shí)驗(yàn)可能前功盡棄。 因此，不厭其煩地說兩句：高脂飼料要親自配，且按要求、按科學(xué)規(guī)律配（等量倍增法）。 飼料成形后，要攤開置通風(fēng)處吹干，或以電風(fēng)扇吹干。不要受熱。在春夏之季，尤應(yīng)注意。因其中含有脂肪油類，且因制飼料時(shí)要經(jīng)過高溫壓制，放在一起易發(fā)熱、生霉。有人置冰箱保存，實(shí)不妥。一則冰箱容量有限；二則飼料中的水分未盡，出冰箱后，冰化，更易生霉，且動物不是太喜歡吃冷藏后的飼料。一次配制飼料不宜過多。一般可配實(shí)驗(yàn)全程所需飼料的一半。后半段根據(jù)前面所消耗的實(shí)際量來酌性增減。但需給足量，寧多一點(diǎn)，不能少。 高脂飼料比普通飼料要軟，易碎。要注意輕拿輕放。底部碎屑可收集起來，再壓制成型。
2. 缺鐵性貧血飼料
3. 缺鋅飼料
第五、實(shí)驗(yàn)動物的飲水
下面我來介紹一下實(shí)驗(yàn)動物飲用水的要求，以及飲水器具。
A 飲用水
實(shí)驗(yàn)動物級別的不同，飲用的水也不同。 通常情況下，普通級動物飲水達(dá)到生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)即可。 清潔級、SPF要求滅菌?？筛邷馗邏簻缇部梢约哟温人徕c，或以鹽酸調(diào)PH到2.5~3.0。后者又稱之為酸化水。 無菌動物飲水只能高溫高壓滅菌。